酵母雙雜交在蛋白互作研究中的應(yīng)用

　　酵母雙雜交技術(shù)以其簡(jiǎn)便、靈敏、高效以及能夠反映不同蛋白質(zhì)之間在活細(xì)胞內(nèi)的相互作用等特點(diǎn)，對(duì)其技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，將使其在蛋白互作的研究中得到更為廣泛的應(yīng)用。

　　基因克隆是分子生物學(xué)中的一種基本的操作方法，通過(guò)雙酶切來(lái)構(gòu)建載體是其中常用的一種方法，這種方法利用限制性內(nèi)切酶可以識(shí)別并切割特定的核苷酸的原理，用兩種不同的限制性內(nèi)切酶切割靶基因得到前后都帶有粘性末端的靶基因片段，與同樣經(jīng)兩種限制性內(nèi)切酶切割得到的帶有相同粘性末端的線性載體在T4DNA連接酶作用下進(jìn)行連接，從而實(shí)現(xiàn)基因克隆酶切效率及連接效率不高等問(wèn)題，致使靶基因片段插入載體相當(dāng)困難，為此人們采取了多種策略進(jìn)行克隆。后來(lái)開(kāi)發(fā)了一種叫做同源重組的基因克隆方法。

　　相比之下，同源重組方法構(gòu)建載體操作相對(duì)簡(jiǎn)單易行。相比雙酶切載體構(gòu)建方法，該方法的構(gòu)建過(guò)程有些不同。首先，靶基因片段擴(kuò)增引物有別于常規(guī)引物設(shè)計(jì)；其次，載體切割過(guò)程中只需要進(jìn)行單酶切；第三，載體和目的基因片段的連接是基于同源重組而不是粘性末端互補(bǔ)。在實(shí)際操作過(guò)程中，雙酶切方法和同源重組方法各有優(yōu)勢(shì)。同源重組方法構(gòu)建載體中最有代表性的是Gateway方法。